martes, 22 de enero de 2013

Práctica 3


Cromatografía de la clorofila



INTRODUCCIÓN Y CONTENIDOS DIDÁCTICOS


    Los pigmentos (clorofilas), que se encuentran en las plantas, algas, constituyen la base de la fotosíntesis, ya que se encargan de absorber la luz solar, y con ello posibilitar la transformación de materia inorgánica en orgánica.
    En esta práctica se extrae el pigmento fotosintético del alga. Para ello utilizamos el
procedimiento de la cromatografía en papel, que consiste en hacer subir sobre un papel
secante el líquido que contiene disueltos los pigmentos.



OBJETIVOS

  •  Extraer el pigmento fotosintético de las algas.
  •  Aplicar una técnica de cromatografía para separar sustancias.

MATERIALES NECESARIOS

  • Mezcla de alcohol, acetona y gasolina a partes iguales.
  •   Varios ejemplares de algas.
  •  Cubeta cromatográfica.
  •    Papel secante blanco.



DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Preparación
§   Se prepara previamente en un vaso de precipitados la mezcla de alcohol, acetona y
    gasolina (eluyente).
§   Usando un poco de esta mezcla, se machacan las algas hasta triturarlas bien.
§   Se vierten las algas machacadas en el recipiente con la mezcla de líquidos, y se dejan en maceración un día.

REALIZACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA

1. Se pone un poco de la mezcla en la
    cubeta cromatográfica.
2. Se corta una tira de papel de 1 cm. x 20
    cm. y se sumerge uno de los extremos
    en el líquido. Hay que buscar la forma de
    que la tira se quede vertical.
3. Puede hacerse la cromatografía de la
    tinta de un bolígrafo o rotulador. Se pinta
    un extremo de la tira de papel y se
    sumerge en un poco de eluyente.

RESULTADOS

1. Pasados unos minutos se observa que el
    líquido empapa la tira de papel secante y
    se forma una pequeña mancha. Aunque,
    pueden aparecer varios pigmentos.
2. En la cromatografía de la tinta del
    bolígrafo o rotulador, se aprecian los
    colores cuya mezcla compone la tinta.


domingo, 13 de enero de 2013

Práctica 2


Mitosis en células de raíz de cebolla


MATERIALES
Microscopio                         Frasco lavador                         
Portaobjetos                         Tijeras
Cubreobjetos                        Mechero de alcohol
Lanceta estéril                      Papel de filtro
Cubeta de tinción                  Vaso de precipitados
Aguja enmangada                   Vidrio de reloj
Pinzas                                   Orceína A
Palillos                                  Orceína B



TÉCNICA

1. Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3-4 días aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm de longitud.
2. Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremos de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orceína A.
3. Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullición, hasta la emisión de vapores tenues.
4. Con las pinzas tomar uno de los ápices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, añadir una gota de orceína B y dejar actuar durante 1 minuto.
5. Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raíz quede extendida.
6. Sobre la preparación colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presión, evitando que el cubre resbale. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se realice.
7. Observar al microscopio.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

Se realizará a fuertes aumentos. La orceína A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tinción. Con la presión sobre el porta de la preparación se logra una extensión y difusión de las células del meristemo de la cebolla.
La preparación presenta el aspecto de una dispersión de células por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan células en diversas fases o estados de división celular. Se ven los cromosomas teñidos de morado por la orceína. El aspecto reticulado así como el mayor tamaño de
algunos núcleos corresponde a las células que se encontraban en los procesos iniciales de la división mitótica.

Práctica 1



EXTRACCIÓN DE ADN

OBJETIVO:
Extraer el ADN de diferentes muestras vegetales.

FUNDAMENTO:

1º.- La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen.

2º.- La sal evita la unión de las proteínas al ADN.

3º.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El
ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.
Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

MATERIAL:

1.- Muestra vegetal: Puede tratarse de cebolla, tomate, plátano, germen de trigo o un puñado de guisantes.
2.- Agua destilada o mineral
3.- Sal de mesa
4.- Detergente lavavajillas
5.- Alcohol de 96 º muy frío
6.- Varilla de vidrio
7.-. Tubo de ensayo
8.- Batidora y un cuchillo.
9.- Vaso de precipitado
10.-Probeta o pipeta

PROCEDIMIENTO:

1.- En el vaso de precipitado pequeño echa 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.
2.- Añade una cucharada de sal.
3.- Añade 25 mililitros de agua destilada.
Es necesario utilizar la pipeta para extraer la cantidad de agua adecuada
4.- Mantener en un baño de hielo esta disolución.
5.- Corta la zona central del vegetal elegido en cuadrados.
6.- Tritura los trozos del vegetal (en el vaso de precipitado grande) con un poco de agua en la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células. Así es como trabajaban nuestros alumnos en la realización de esta práctica
7.- Mezcla en el recipiente grande el triturado celular con la disolución inicial del vaso.
8.- Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.
9.- Haz pasar el líquido obtenido por un colador.
10.- Retira 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y añade con la pipeta 5 mililitros de alcohol enfriado a 0º C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la mezcla.
11.- Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2 capas. (Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientes empleados anteriormente).
12.- Introduce una varilla justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre las 2 capas). Remueve la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
13.- Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la capa de alcohol, con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo, con el aspecto de un copo de algodón mojado.
14.- Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.

RESULTADOS:

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro, ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción “profesional” se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN y que impiden que se unan al ADN.